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重組大腸桿菌BL21-pET28a(+)-ADH誘導表達羰基還原酶的條件優(yōu)化與應用
目的:對重組大腸桿菌E.coli BL21-pET28a(+)-ADH表達羰基還原酶的條件進行優(yōu)化,以增加目的蛋白的表達量,提高生物合成(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇的轉(zhuǎn)化率.方法:將重組質(zhì)粒pET28a(+)-ADH轉(zhuǎn)化E.coli BL21后,對誘導過程產(chǎn)生影響的4個因素,誘導時間、誘導溫度、誘導劑濃度及搖菌轉(zhuǎn)數(shù),利用SPSS統(tǒng)計學軟件進行正交實驗設計,并對實驗結(jié)果進行直觀分析及方差分析,對實驗得出的最佳搭配誘導條件進行驗證.結(jié)果:直觀分析中誘導溫度的R值最大,其次為搖菌轉(zhuǎn)數(shù)和誘導劑IPTG濃度,誘導時間的R值最小;方差分析表明誘導溫度的P值小于0.05,而搖菌轉(zhuǎn)數(shù)、IPTG濃度及時間因素的P值均大于0.05.利用優(yōu)化后的菌種生物合成(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇,轉(zhuǎn)化率達到95.16%.結(jié)論:本實驗的最優(yōu)誘導條件為,誘導溫度25℃、誘導搖菌轉(zhuǎn)數(shù)200r·min-1、誘導劑IPTG濃度0.5mmol·L-1、誘導時間6h.且重組菌對于(S)-3,5-雙三氟甲基苯乙醇的轉(zhuǎn)化率達到95.16%.
作 者： 李莉 張芳 羅晨 闞靜 王旻 作者單位： 李莉,羅晨,闞靜,王旻 (中國藥科大學生命科學與技術(shù)學院,南京,210009)張芳(南京中醫(yī)藥大學藥學院生物制藥教研室,南京,210046)
刊 名： 藥學與臨床研究 ISTIC 英文刊名： PHARMACEUTICAL AND CLINICAL RESEARCH 年，卷(期)： 2010 18(2) 分類號： Q78 關(guān)鍵詞： 羰基還原酶 條件優(yōu)化 正交試驗 直觀分析 方差分析 生物轉(zhuǎn)化【重組大腸桿菌BL21-pET28a(+)-ADH誘導表達羰基還原酶的條件】相關(guān)文章：
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