豬β干擾素在畢赤酵母中的分泌表達及其對偽狂犬病毒的抑制作用

為了研制高活性的重組豬β干擾素,對PoIFN-β成熟蛋白第3、7和164位的3個氨基酸密碼子進行畢赤酵母偏嗜性改造并構(gòu)建了酵母表達載體pPICZαA-PIB.pPICZαA-PIB經(jīng)SacⅠ酶切線性化后電轉(zhuǎn)化導(dǎo)入畢赤酵母菌株X-33.多株P(guān)CR鑒定為陽性的酵母轉(zhuǎn)化子經(jīng)甲醇誘導(dǎo)發(fā)酵分泌表達了PoIFN-β, 其中B1株酵母的PoIFN-β產(chǎn)量最高,約為2.5×105U/mL,其表達量約為60μg/mL,比活為4.17×106U/mg.將發(fā)酵上清液用PEG20000濃縮后進行SDS-PAGE和Western blot檢測,結(jié)果表明表達產(chǎn)物是分子量約為28kDa和25kDa蛋白的混合物,兩者均可與PoIFN-β陽性抗血清發(fā)生特異反應(yīng).表達產(chǎn)物比PoIFN-β理論推導(dǎo)分子量(約20.8kDa)大,推測可能是表達產(chǎn)物發(fā)生了不同程度的糖基化.重組PoIFN-β對偽狂犬病毒在細(xì)胞中增殖可呈現(xiàn)抑制作用,并且rPoIFN-β對偽狂犬病毒在MDBK細(xì)胞上早期增殖的抑制效果最為明顯.

作 者： 曹瑞兵 周國棟 周海霞 包晶晶 陳溥言 CAO Rui-bing ZHOU Guo-dong ZHOU Hai-xia BAO Jing-jing CHEN Pu-yan   作者單位： 南京農(nóng)業(yè)大學(xué),農(nóng)業(yè)部動物疫病診斷與免疫重點開放實驗室,南京,210095  刊 名： 微生物學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 豬β干擾素   畢赤酵母   分泌表達   偽狂犬病毒   抗病毒  

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