鈣網(wǎng)蛋白-N58在畢赤酵母中的表達及活性分析

目的:利用畢赤酵母表達系統(tǒng)表達Calreticulin-N58蛋白.方法:利用重疊延伸PCR方法合成Calreticulin-N58基因,構(gòu)建成分泌型的重組表達載體pPIC9K-CRT-N58.該重組表達載體經(jīng)Sac I線性化后,電激轉(zhuǎn)化人畢赤酵母GS115,經(jīng)MD板和不同濃度G418篩選得到多拷貝重組菌株.經(jīng)甲醇誘導(dǎo)表達目的蛋白,SDS-PAGE分析重組蛋白的表達情況,在雞胚中進行活性分析.結(jié)果:重組質(zhì)粒pPIC9K-CRT-N58在畢赤酵母中經(jīng)甲醇誘導(dǎo)能分泌表達CRT-N58蛋白,搖瓶表達量大約為60mg/L,純化的目的蛋白有顯著的血管生成抑制作用.結(jié)論:實驗成功地在畢赤酵母表達系統(tǒng)中實現(xiàn)了Calreticulin-N58的分泌表達.為Calreticulin-N58蛋白的進一步藥用研究奠定了基礎(chǔ).

作 者： 周細南 蘇東曉 潘英文 張?zhí)碓?張愛聯(lián) ZHOU Xi-nan SU Dong-xiao PAN Ying-wen ZHANG Tian-yuan ZHANG Ai-lian   作者單位： 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物生物技術(shù)國家重點實驗室,海南海口,571101  刊 名： 生物技術(shù)  PKU 英文刊名： BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 18(3)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： calreticulin-N58   畢赤酵母   分泌表達   生物活性  

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