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滅蚊真菌貴陽腐霉原生質(zhì)體的制備和再生研究
目的:建立貴陽腐霉原生質(zhì)體的制備和再生系統(tǒng),為該菌的基因工程和細(xì)胞工程改良提供適宜的真菌狀態(tài).方法:對(duì)影響原生質(zhì)體形成的各因素,包括菌齡、消化酶的種類和比例、消化時(shí)間以及滲透壓穩(wěn)定劑的成分和濃度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比較.結(jié)果:以1.%纖維素酶與1.%溶壁酶1∶1組合聯(lián)合脫壁,0.6mol/L的甘露醇作滲透壓穩(wěn)定劑,酶解采用KPYG2培養(yǎng)基培養(yǎng)52～54 h的貴陽腐霉菌菌絲,消化5 h所獲得的原生質(zhì)體數(shù)最多,原生質(zhì)體濃度可達(dá)到6.48×106個(gè)/ml;在0.6 mol/L甘露醇作滲透壓穩(wěn)定劑的KPYG2培養(yǎng)基上,原生質(zhì)體再生率為0.043%.結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)所總結(jié)的原生質(zhì)體制備方法可以獲得在基因轉(zhuǎn)化或細(xì)胞突變誘導(dǎo)所需的原生質(zhì)體濃度.
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