銅綠假單胞菌噬菌體PaP3末端酶大亞單位DNA結(jié)合能力的測定

目的 檢測銅綠假單胞菌噬菌體PaP3末端酶大亞單位與噬菌體基因組末端cos位點的結(jié)合能力.方法 通過PCR擴增出末端酶大亞單位編碼基因tls,經(jīng)pMD-T18載體克隆至表達載體pQE31上,IPTG誘導表達,獲得包涵體蛋白,用包涵體裂解液溶解包涵體,通過Ni-NTA親和層析,分離出重組目的蛋白rTLS,透析復性后,與生物素標記的基因組末端cos片段進行結(jié)合反應,通過EMSA檢測DNA滯后現(xiàn)象.結(jié)果 成功構(gòu)建了表達載體pQE-tls,獲得了純化的具有生物學活性的重組末端酶大亞單位rTLS,EMSA結(jié)果證實結(jié)合rTLS后的cos片段與無蛋白加入的對照組相比明顯滯后.結(jié)論 重組噬菌體PaP3末端酶大亞單位在體外可與基因組末端cos片段發(fā)生特異性結(jié)合,為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎.

作 者： 申曉冬 張克斌 李明 周瑩冰 蹇銳 胡曉梅 陳志瑾 饒賢才 胡福泉 SHEN Xiao-dong ZHANG Ke-bin LI Ming ZHOU Ying-bing JIAN Rui HU Xiao-mei CHEN Zhi-jin RAO Xian-cai HU Fu-quan   作者單位： 申曉冬,李明,周瑩冰,蹇銳,胡曉梅,陳志瑾,饒賢才,胡福泉,SHEN Xiao-dong,LI Ming,ZHOU Ying-bing,JIAN Rui,HU Xiao-mei,CHEN Zhi-jin,RAO Xian-cai,HU Fu-quan(第三軍醫(yī)大學,基礎醫(yī)學部微生物學教研室,重慶市微生物工程實驗室,重慶,400038)

張克斌,ZHANG Ke-bin(第三軍醫(yī)大學,新橋醫(yī)院醫(yī)學實驗技術(shù)中心,重慶,400037) 

刊 名： 第三軍醫(yī)大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE  年，卷(期)： 2006 28(22)  分類號： Q55 Q782 Q936  關(guān)鍵詞： 末端酶大亞單位   噬菌體PaP3   EMSA   蛋白表達  

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