基因重組BDNF蛋白在大腸桿菌中的表達(dá)純化與功能鑒定

目的 構(gòu)建腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)基因的原核表達(dá)載體,并在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),以獲取高產(chǎn)量、低成本、高純度且具有生物學(xué)活性的BDNF蛋白.方法 以人的全長(zhǎng)BDNFcDNA為模板,用PCR方法擴(kuò)增成熟區(qū)BDNF的cDNA,應(yīng)用基因重組技術(shù)將人BDNF cDNA克隆到質(zhì)粒pET-30a(+)中,進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切分析和DNA測(cè)序鑒定.將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)LysS,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后,用Ni-NTA親和層析純化獲取蛋白,用SDS-PAGE和western blot方法鑒另,噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)重組蛋白對(duì)PC12細(xì)胞增殖的影響. 結(jié)果 擴(kuò)增出的人BDNF cDNA片段克隆進(jìn)了原核表達(dá)載體,經(jīng)酶切和核酸測(cè)序鑒定,得到了正確的重組質(zhì)粒pET-BDNF,并在大腸桿菌中獲得了表達(dá).純化后的蛋白經(jīng)考馬氏亮藍(lán)染色呈單一條帶;用抗BDNF的抗體進(jìn)行western blot分析證明目的蛋白獲得了表達(dá).基因重組BDNF蛋白能夠促進(jìn)PC12細(xì)胞增殖.結(jié)論 本研究成功構(gòu)建了表達(dá)基因重組人BDNF的原核表達(dá)載體,基因重組人BDNF蛋白在大腸桿菌中獲得了表達(dá)和純化,所獲得的基因重組蛋白具有較好的生物學(xué)活性.

作 者： 馬蕾蕾 蘇丹 季愛(ài)民 MA Lei-lei SU Dan JI Ai-min   作者單位： 510282,廣州,南方醫(yī)科大學(xué)珠江醫(yī)院新藥研發(fā)中心  刊 名： 中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF NEUROMEDICINE  年，卷(期)： 2006 5(11)  分類號(hào)： Q5  關(guān)鍵詞： 腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子   大腸桿菌   蛋白表達(dá)   蛋白純化   生物學(xué)活性  

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