大鼠CD40基因RNA干擾真核表達載體的構建及鑒定

目的:構建靶向大鼠CD40基因小分子干擾RNA(siRNA)真核細胞表達載體.方法:利用Ambion公司的網(wǎng)上設計工具,設計2個靶向CD40基因的發(fā)夾狀siRNA,通過化學合成的方法合成2對分別互補的寡核苷酸鏈,退火后將雙鏈DNA片段連接至pSilencer4.1-CMV neo vector的多克隆位點,轉化擴增提取質粒,對重組質粒進行BamHⅠ和Hind Ⅲ雙酶切電泳鑒定和DNA序列分析鑒定.結果:經(jīng)酶切電泳鑒定和DNA序列分析鑒定,目的片段與pSilencer4.1-CMV neo vector連接正確,靶向大鼠CD40基因的siRNA重組表達質粒構建成功.結論:成功構建了大鼠CD40基因的RNA干擾真核表達載體pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,為進一步研究CD40基因在同種器官移植排斥反應中的作用奠定基礎.

作 者： 王楠 馬慶久 魯建國 何顯力 鄒愛民 李坤 WANG Nan MA Qing-jiu LU Jian-guo HE Xian-li ZOU Ai-min LI Kun   作者單位： 王楠,馬慶久,魯建國,何顯力,WANG Nan,MA Qing-jiu,LU Jian-guo,HE Xian-li(第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院普通外科,陜西西安,710038)

鄒愛民,李坤,ZOU Ai-min,LI Kun(第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院中心實驗室,陜西西安,710038) 

刊 名： 醫(yī)學研究生學報  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES  年，卷(期)： 2008 21(3)  分類號： Q782  關鍵詞： RNA干擾   CD40   重組載體  

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