采用SEREX方法從cDNA表達(dá)文庫中篩選大腸癌抗原基因

目的 尋找人源性大腸癌特異性抗原基因.方法 采用SMART技術(shù)構(gòu)建人大腸癌組織來源的eDNA噬菌體表達(dá)文庫,以自體或異體大腸癌患者血清按SEREX方法進(jìn)行免疫篩選,對(duì)平板法擴(kuò)增獲得的陽性克隆片段導(dǎo)人克隆載體PUCm-T后進(jìn)行測(cè)序、鑒定和BLAST同源性比較,并根據(jù)cDNA序列進(jìn)行生物信息分析.結(jié)果 構(gòu)建了3個(gè)大腸癌抗原cDNA噬菌體表達(dá)文庫,其滴度分別為2.39×106 pfu/mL、2.07 × 106 pfu/mL和1.86×106 pfu/mL,插入片段長度為0.5～4 kb,平均分別為1.4、1.6和1.3 kb,重組率最高達(dá)到97.5%.選擇高滴度文庫擴(kuò)增后滴度達(dá)到4.1×1010 pfu/mL.SEREX篩選共獲得16個(gè)陽性克隆,代表12個(gè)不同抗原基因,其中10個(gè)基因片段為已知抗原基因,如IFITM1、CD24、Survivin、KLK6等,2個(gè)為未知EST片段.根據(jù)序列分析,篩選出的抗原基因有結(jié)構(gòu)基因、調(diào)節(jié)基因、代謝相關(guān)基因等.結(jié)論 利用SEREX方法篩選出大腸腫瘤相關(guān)抗原基因并獲得2個(gè)腫瘤抗原候選基因.

作 者： 肖冰 劉宇虎 何敬東 賴卓勝 張振書 XIAO Bing LIU Yuhu HE Jingdong LAI Zhuosheng ZHANG Zhenshu   作者單位： 南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院消化科,廣東,廣州,510515  刊 名： 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志  ISTIC 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF GASTROENTEROLOGY AND HEPATOLOGY  年，卷(期)： 2008 17(4)  分類號(hào)： Q343.1  關(guān)鍵詞： 結(jié)直腸腫瘤   血清學(xué)篩選技術(shù)   抗原基因   cDNA表達(dá)文庫  

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