抗果蠅Trio蛋白抗體的制備及鑒定

目的:制備兔抗果蠅Trio蛋白的抗體.方法:以RT-PCR擴(kuò)增Trio的1 173 bp的基因片段并克隆入pET28a(+) 和pGEX-4T-1 (His)6C表達(dá)載體中,表達(dá)并純化Trio-His、Trio-GST融合蛋白.用純化的Trio-His融合蛋白免疫家兔產(chǎn)生抗Trio的抗體,用Trio-GST親和層析法進(jìn)行純化并采用Western blot法檢測(cè)抗體生物學(xué)活性.結(jié)果:表達(dá)的Trio-His蛋白以包涵體的形式存在,用His親和層析法分離純化后得到較純的Trio-His融合蛋白,以純化的Trio-His免疫家兔制備的兔抗Trio的抗體,經(jīng)Western blot分析顯示該抗體可與果蠅S2細(xì)胞Trio特異性結(jié)合.結(jié)論:獲得具有良好特異性的兔抗Trio抗體,為進(jìn)一步研究Trio的功能奠定了基礎(chǔ).

作 者： 繆峰 呂雯雯 丁潔 袁榴娣 MIAO Feng Lü Wen-wen DING Jie YUAN Liu-di   作者單位： 東南大學(xué),發(fā)育與疾病相關(guān)基因教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,江蘇,南京,210009  刊 名： 東南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2008 27(4)  分類(lèi)號(hào)： Q786  關(guān)鍵詞： Trio基因   原核表達(dá)   抗體制備  

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