三丙二酸富勒烯對DNA限制性內切酶和Taq DNA聚合酶活性的抑制作用

采用具有HindⅢ和EcoRⅠ單一酶切位點的pEGFP-N1超螺旋型質粒為底物,檢測三丙二酸富勒烯(trimalonic acid C60,TMA C60)對DNA限制性酶切反應的作用.同時以該質粒為模板,測定TMA C60對Taq DNA聚合酶催化的聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction,PCR)的影響.酶切產物與PCR擴增產物均通過瓊脂糖凝膠電泳來顯示.實驗發(fā)現(xiàn),在質粒酶切體系或PCR體系中添加TMA C60后,酶切或擴增產物的生成量均顯著減少.TMA C60的作用存在濃度依賴性,對HindⅢ,EcoRⅠ兩種酶切反應和PCR的半抑制濃度IC50值分別為16.3,6.0,6.0 μmol/L.兩種活性氧清除劑L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂和疊氮化鈉在濃度為2～10 mmol/L時,不能拮抗TMA C60對PCR和兩種酶切反應的抑制作用.但是,在PCR體系中增加Taq DNA聚合酶能夠拮抗TMA C60的作用.這些結果表明,TMA C60能夠抑制上述3種DNA代謝相關酶的活性,其作用可能與活性氧無關.

作 者： 楊新林 陳哲 孟憲梅 李博 譚信   作者單位： 北京理工大學生命科學與技術學院,北京,100081  刊 名： 科學通報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE SCIENCE BULLETIN  年，卷(期)： 2007 52(4)  分類號： O6  關鍵詞： 三丙二酸富勒烯   DNA限制性內切酶   Taq DNA聚合酶   活性氧   抑制  

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