小鼠神經生長因子前導肽和人內嗎啡肽-2融合基因重組腺病毒載體的構建與鑒定

目的:制備并鑒定攜帶小鼠神經生長因子前導肽(PN)和人內嗎啡肽-2(EM-2)融合基因的重組非增殖型腺病毒.方法:PN-EM-2目的基因經酶切插入pAxCAwt載體,構建PN-EM-2-pAxCAwt重組黏粒,脂質體轉染293細胞獲取重組腺病毒.PCR鑒定后擴增不含野生型病毒的陽性克隆并純化,采用TCID50法測定病毒滴度;體外感染NIH3T3細胞觀察轉基因的表達,酶聯免疫反應(EIA)法測定表達產物濃度.結果:融合基因序列正確,PCR可檢測到401 bp的融合基因條帶并排除野生病毒株,腺病毒Ad-PN-EM-2滴度為2.03×1010pfu/ml.NIH3T3細胞轉染病毒后,細胞培養(yǎng)液內可檢測到EM-2的表達,明顯高于空轉染及未轉染細胞(P＜0.05),且隨時間的延長,表達水平逐漸上升.結論:成功構建能夠在非神經內分泌細胞內轉基因表達成熟人EM-2的非增殖型腺病毒,為進一步將其應用于慢性疼痛的基因治療奠定了基礎.

作 者： 吳飛翔 俞衛(wèi)鋒 黃盛東 徐學武 龔德軍 董剛 袁揚 孫玉明   作者單位： 吳飛翔,俞衛(wèi)鋒,徐學武,董剛,孫玉明(第二軍醫(yī)大學東方肝膽外科醫(yī)院麻醉科,上海,200438)

黃盛東,龔德軍,袁揚(第二軍醫(yī)大學長海醫(yī)院胸心外科,解放軍胸心外科研究所,上海,200433) 

刊 名： 第二軍醫(yī)大學學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY　MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2007 28(11)  分類號：   關鍵詞： 內嗎啡肽-2   神經生長因子   腺病毒科  

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