蛋白提取實(shí)驗(yàn)步驟

　　在學(xué)習(xí)、工作生活中，報(bào)告不再是罕見的東西，通常情況下，報(bào)告的內(nèi)容含量大、篇幅較長(zhǎng)。為了讓您不再為寫報(bào)告頭疼，下面是小編幫大家整理的蛋白提取實(shí)驗(yàn)步驟，歡迎大家分享。

　　蛋白提取實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1、細(xì)胞總蛋白提取

　　A、對(duì)于懸浮細(xì)胞: 離心收集細(xì)胞，每106細(xì)胞加250 ul RIPA（在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑），振蕩。如果需要提高蛋白濃度，可以適當(dāng)減少細(xì)胞總蛋白提取試劑體積。

　　B、對(duì)于貼壁細(xì)胞:

　　a、用TBS沖洗細(xì)胞2-3次。最后一次徹底吸干殘留液。

　　b、加入適當(dāng)體積的 RIPA（使用前數(shù)分內(nèi)加入蛋白酶抑制劑）于培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi)3-5分鐘。期間反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板、瓶，使試劑與細(xì)胞充分接觸。

　　c、用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞及試劑刮下，收集到1.5ml離心管中。

　　C、冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。

　　D、12000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。

　　2、組織蛋白提�。�

　　A、組織塊用冷TBS洗滌2-3次，去除血污，剪成小塊置于勻漿器。加入10倍組織體積本試劑（使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑）冰上徹底勻漿。如果需要提高蛋白濃度，可以適量減少該試劑體積。

　　B、將勻漿液轉(zhuǎn)移至1.5ml離心管中，振蕩。冰浴30min，期間用移液器反復(fù)吹打，確保細(xì)胞完全裂解。

　　C、12000g離心5min，收集上清，即為總蛋白溶液。

　　注意事項(xiàng)

　　1、組織盡可能新鮮，若不能及時(shí)提蛋白，組織標(biāo)本應(yīng)保存在-80℃冰箱，并避免反復(fù)凍融。

　　2、全程必須在冰上進(jìn)行，避免蛋白降解。

　　3、蛋白酶抑制劑在水溶液中不穩(wěn)定，需在RIPA使用前數(shù)分鐘加入蛋白酶抑制劑。

　　4、裂解過程中如有溶液粘稠現(xiàn)象可用移液器（200μl）反復(fù)吹打，或再加入適量裂解液以保證充分裂解。

　　5、總蛋白溶液不穩(wěn)定（蛋白酶依舊有活性）可在-80℃短時(shí)間保存，建議立即加入蛋白上樣緩沖液變性后與-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

　　蛋白質(zhì)的分類，從來源上可以分為動(dòng)物蛋白質(zhì)、植物蛋白質(zhì)；從營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可以分為完全蛋白質(zhì)、半完全蛋白質(zhì)、不完全蛋白質(zhì)。

　　1.來源分類

　　（1）動(dòng)物性蛋白質(zhì)：主要包括一些動(dòng)物的肉類（比如牛肉、豬肉、魚肉、雞肉等）以及蛋類（雞蛋、鴨蛋、鵪鶉蛋等）、奶產(chǎn)品（牛奶、羊奶等）等，含有較多的氨基酸，有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，易吸收。

　�。�2）植物性蛋白質(zhì)：主要來源于豆制品（豆腐、豆皮、豆?jié){等）或者是谷類（大米、小麥、小米等）等食品，含有不同含量的植物蛋白質(zhì)。

　　2.營(yíng)養(yǎng)學(xué)分類

　　（1）完全蛋白質(zhì)中所含氨基酸相比較來說品種比較多，數(shù)量也充足，比如：奶制品、蛋類、動(dòng)物肝臟等食物中的蛋白質(zhì)。

　　（2）不完全蛋白質(zhì)含有氨基酸種類和數(shù)量都比較少，例如動(dòng)物明膠、玉米膠蛋白。

　　（3）半完全蛋白質(zhì)氨基酸種類也比較多，但相比較來說含量不足，比如麥膠蛋白中的成份。

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